高效液相色譜儀作為一種分離分析方法,應用廣泛,具有分析效率高、選擇性好、分析速度快、檢測靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統、溫度控制系統、色譜柱、檢測器、信號記錄系統等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較,具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。 高效液相色譜儀的工作流程:貯液器中經(jīng)過(guò)濾的流動(dòng)相由高壓輸液泵以穩定的流速或壓力輸送到色譜柱入口;(若采用梯度淋洗方式常需雙泵系統完成流動(dòng)相的輸送)樣品由進(jìn)樣器自進(jìn)樣口注入后隨流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱,在色譜柱中完成組分分離。分離后的組分隨流動(dòng)相離開(kāi)色譜柱依次進(jìn)入檢測器,檢測器將檢測到的信號輸給記錄儀(工作站)或其它數據處理系統記錄、處理和保存。
高效液相色譜儀進(jìn)樣和輸液系統分析:
進(jìn)樣系統:一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。
輸液系統:
該系統包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的流速可調且穩定,當高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí),可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存器和梯度儀,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。